مطالعه ترموديناميكي پايانه كربوكسيل نوروتوكسين بوتولينوم تيپ E با روش طيف سنجي دورنگ نمايي دوراني

Thermodynamic Study of Carboxy Terminal of Botulinum Neurotoxin Type E by Circular Dichroism Spectroscopy

به منظور پيشگيري از سندروم بوتوليسم، به تازگي محققين به استفاده از واكسن هاي نوتركيب توجه خاصي نشان داده اند. يكي از اين واكسن-ها، پروتيين نوتركيب حاوي 93 اسيد آمينه انتهاي كربوكسيلي نوروتوكسين بوتولينوم تيپ E (rBoNT/E-HCC) است. در اين تحقيق پس از بيان و تخليصrBoNT/E-HCC، به بررسي اثر pH بر اين پروتيين توسط طيف سنجي دورنگ نمايي دوراني (Circular Dichroism, CD) پرداخته شده و به دنبال آن مطالعات ترموديناميكي به منظور يافتن شرايط بهينه تخليص و سنجش امكان استفاده از اين كانديد، واكسن به صورت خوراكي مورد بررسي قرار گرفته است. بدين منظور واسرشتگي حرارتي rBoNT/E-HCC در چهار pH مختلف (2، 5، 4/7 و9) توسط CD مورد بررسي قرار گرفته است. نتايج نشان داده كه Tm و ?G° پروتيين rBoNT/E-HCC در pHهاي بازي نسبت به pH هاي اسيدي بالا تر است. در نتيجه يافته هاي اين تحقيق، بهترين شرايط تخليص براي پروتيين rBoNT/E-HCC، شرايط با pH خنثي يا باز مي باشد.

Nowadays for prevention of botulism syndrome, researchers have tended to use recombinant vaccines. One of these vaccines is a recombinant protein containing 93 amino acids of C-terminal of botulinum neurotoxin type E (rBoNT/E-HCC). In this study, after expression and purification of rBoNT/E-HCC, the effect of different pH on the protein was carried out by Circular dichroism (CD) spectrometry and followed by thermodynamics studies. The main goal was, to find the optimum purification condition for this protein and also to evaluate the possibility of using this protein as an oral vaccine. For this purpose, thermal danaturation of rBoNT/E-HCC was studied at four different pH (2, 5, 7.4, and 9) by CD. Our results indicated that Tm and ?G° of rBoNT/E-HCC are higher in alkaline pH in comparison with acidic pH. Finally, our results suggest that; neutral or alkaline pH as the optimum pH for rBoNT/E-HCC purification.