استخراج و شناسايي اسكوپولتين از كشت سوسپانسيون سلولي زيره سياه (Bunium persicum)

Isolation and Identification of Scopoletin from Cell Suspension Cultures of Black Zira (Bunium persicum

امروزه استفاده از قابليت‌هاي كشت سلولي براي توليد مواد موثره دارويي بسيار مورد توجه است. تركيبات فلورسانس در بسياري از زمينه‌ها مانند محيط زيست، صنايع غذايي و پزشكي ارزشمند مي‌باشند. در اين پژوهش كشت سوسپانسيون سلولي زيره سياه، بهعنوان يك گياه دارويي مهم در ايران، در محيط كشت MS مايع حاوي 2 ميلي‌گرم در ليتر NAA و 5/0 ميلي‌گرم در ليتر BA استقرار يافت. براي جداسازي و خالص‌سازي تركيب فلورسانس موجود در سلول‌هاي كشت سوسپانسيون، مقدار 100 گرم سلول خشك را با 100 ميلي‌ليتر دي‌كلرومتان عصاره‌گيري كرده و سپس از ستون كروماتوگرافي و روش Preparative TLC براي خالص‌سازي آن استفاده شد. از مخلوط دو حلال دي‌كلرومتان و متانول با نسبت 1:9 بهعنوان فاز متحرك استفاده گرديد. نتايج TLC عصاره‌هاي تهيهشده از اندام‌هاي مختلف گياه (بذر، ساقه، برگ، ريشه و بذر) و سلول‌هاي كشت سوسپانسيون زير نور UV با طول موج 365 نانومتر نشان داد كه يك تركيب فلورسانس آبيرنگ در اندام ريشه و سلول‌هاي كشت سوسپانسيون وجود دارد كه در اندام‌هاي هوايي گياه ديده نمي‌شود. همچنين در شرايط كاملا يكسان مقدار اين تركيب در بافت كالوس كمتر از سلول‌ مي‌باشد و مقداري از اين تركيب فلورسانس به درون محيط كشت مايع آزاد مي‌شود. بهمنظور شناسايي اين تركيب از روش رزونانس مغناطيسي هسته استفاده گرديد و نتايج آن نشان داد كه اين تركيب يكي از مشتقات كومارين (6- متوكسي 7- هيدروكسي كومارين) است. افزودهشدن گروه‌هاي متيل و هيدروكسي به ساختار كومارين سبب ايجاد ويژگي فلورسانسي در آن مي‌شود.

Nowadays plant cell suspension cultures have become an attractive source for secondary metabolites production. The fluorescent compounds are highly valuable in a variety of fields including environmental chemistry and medical and food industries. In this study the cell suspension cultures of black zira, an important medicinal plant in Iran, was established in MS liquid medium supplemented with 2 mg/l NAA and 0.5 mg/l BA. For isolation and identification of fluorescent compound in cell suspension culture samples, 100 gr dried cell with 100 mL dichloromethane was extracted followed by subjecting on a column chromatography and then preparative TLC. The mobile phase was selected as dichloromethane-methanol; 9:1. The TLC comparison of extracts from different parts of the plant (seed, stem, leaf and root) as well as cell suspension culture samples showed that under UV light 365, a blue fluorescent component is present in cell samples whereas nothing was found in the extracts of arial parts of the plant. It is also found that a little fluorescent component has been released into the medium. Results of this study demonstrated the fluorescent component content in callus is less than cell samples under the same conditions. This compound was identified by Nuclear Magnetic Resonance analysis as one of the coumarin derivatives (6-methoxy 7-hydroxy coumarin). Substitutions a methyl group or hydroxyl on the coumarin structure shifted the fluorescent band.