بررسي پروتيوميكي گياهان تراريخت شده باGR-RBP2 در مقايسه با گياه وحشي

Proteomic analysis of transgenic Arabidopsis plants over expressing GR-RBP2 in comparison with Wild Type

GR-RBP2 يكي از 8 عضو خانواده GR-RBP در گياه آرابيدوپسيس است كه پس از ترجمه درميتوكندري جاي مي گيرد. مطالعه حاضر به منظور بررسي پروتيوميكي گياهان تراريخت شده با GR-RBP2 در مقايسه با گياه وحشي صورت گرفته است. در اين مطالعه ژن GR-RBP2 از گياه آرابيدوپسيس جداسازي و در پلاسميد pBIN19 كلون شد. سپس پلاسميد نوتركيب از طريق باكتريAgrobacterium tumefaciens و به روش Floral Dipping به گياه آرابيدوپسيس انتقال يافت. با انتقال cDNA كامل GR-RBP2 بيست و يك لاين به دست آمد. گياهان تراريخت شده از نظر فنوتيپي و زمان گلدهي تفاوتي را با گياه وحشي نشان نداده و قادر به توليد بذر بودند. ميزان بيان ژن در سه لاين تراريخت شده مختلف و گياه وحشي تعيين شد. ميزانmRNA درگياهان تراريخت شده 2 برابر بيشتر از گياه وحشي بود. آناليز پروتيوميكي با استفاده از دو سيستم ژل مختلف صورت گرفت: 2D IEF/ SDS PAGE و 2D Blue-native/SDS PAGE. تمام ژلها با نقره رنگ آميزي شدند. نتايج حاصل از ژل الكتروفورز 2 بعدي نشان داد كه پروتيين GR-RBP2 در لاينهاي تراريخت شده افزايش بيان داشته است. اين نتايج نشان داد كه پروتيينهاي زنجيره تنفسي در لاينهاي تراريخت شده مورد بررسي و گياه وحشي به فراواني وجود دارد. كمپلكس V زنجيره تنفسي (كمپلكس (F1 تا حدودي تخريب شده بود اما اين امردر تمام لاينهاي تراريخت شده و گياه وحشي مشابه بود. آناليز طيفهاي MS به شناسايي 110 لكه پروتييني منجر شد كه 6 لكه پروتييني در لاينهاي تراريخت شده در مقايسه با گياه وحشي افزايش نشان داد. نگاهي به برخي پروتيينهاي شناخته شده نشان داد كه هيچ تغييرعمده اي كه نشاندهنده تحريك يا سركوب برخي مسيرهاي متابوليكي باشد وجود ندارد.

Glycine-Rich RNA Binding Protein2 (GR-RBP2) is one of the eight GR-RBP family members in Arabidopsis thaliana which is located in mitochondria after translation. Here we employed a proteomic approach to compare transgenic Arabidopsis plants over expressing GR-RBP2 with Wild Type. In this study, GR-RBP2 gene was isolated from Arabidopsis and cloned into pBIN19 vector. Recombinant vector was transferred to Arabidopsis (Col-0) via Agrobacterium tumefaciens by Floral Dipping method. Transformation with full length cDNA of GR-RBP2 yielded 21 lines. Over expressing plants are indistinguishable from WT seedlings. The whole lines are unchanged with regard to flowering time and are fully fertile. Gene expression levels were determined in different over expressing lines compare with WT seedlings. The mRNA level in over expressing lines was 2 times higher than WT. Proteomic analysis of over expressing lines were carried out on two different gel systems: 2D IEF/ SDA PAGE and 2D Blue-native/SDS PAGE. All gels were silver stained. 2D gel electrophoresis revealed that GR-RBP2 was induced in over expressing lines. Results showed that respiratory chain looks very much in the same investigated lines and WT. Complex V was partially degraded (F1 complex), but this also is the same in all samples. Approximately 110 spots were identified by mass spectrometry. Six protein spots were increased in over expressing lines compared to WT. A look at some well known proteins showed that there is no major change indicating induction or repression of metabolic pathways.