بررسي بعضي از خصوصيات آنزيمي اسيد فسفاتاز در مراحل لگاريتمي و ايستاي پروماستيگوت هاي ليشمانيا ماژور

Some enzymatic properties of Acid phosphatase in the logarithmic and stationary phase of Leishmania major

مقدمه: ليشمانيا انگل درون سلولي اجباري بوده كه طيف وسيعي از بيماري ها را ايجاد كرده و توسط پشه خاكي آلوده منتقل مي گردد. اين انگل در بدن پشه خاكي به فرم پروماستيگوت مي باشد. رشد پروماستيگوت ها داراي دو مرحله لگاريتميك غير عفونت زا و ايستاي عفونت زا است. با توجه به تجمع اسيد فسفاتاز در مرحله ايستا و نقش آن در شدت بيماري زايي انگل در اين مطالعه خصوصيات آنزيمي و ميزان فعاليت اسيد فسفاتاز، Vmax و Km آن در دو مرحله لگاريتمي و ايستا با يكديگر مقايسه گرديد. مواد و روش ها: اين مطالعه يك مطالعه مقطعي بوده و براي رسيدن به اهداف از پيش تعيين شده انگلLeishmania major(MRHO/IR/75/ER) از موش هاي Balb/c از قبل آلوده شده به محيط كشت منتقل و به شكل پروماستگوت رشد داده شد سپس با رسم منحني رشد و بر اساس آن، پروماستيگوت هاي مراحل لگاريتميك و ايستا از يكديگر جدا شدند. نمونه هاي جمع آوري شده از هر مرحله از رشد پس از انجماد، همراه با بافر سديم استات و Triton-X-100 هموژنيزه شده و پس از سانتريفيوژ، اسيد فسفاتاز مايع رويي به روش كالريمتري اندازه گيري شد. يافته هاي پژوهش: انگل هاي مرحله لگاريتميك در روز چهارم و انگل هاي مرحله متاسيكليك يا ايستا در روز هفتم رشد جمع آوري شدند. ميزان فعاليت اسيد فسفاتاز در پروماستيگوت هاي لگاريتميك 03/0±9/0 و پروماستيگوت هاي ايستا 01/0±18/1 ميكرومول به ازا هر ميلي گرم پروتيين در دقيقه اندازه گيري شد. هم چنينVmax آنزيم اسيد فسفاتاز در مرحله لگاريتمي 57/0±76/75 و در مرحله ايستا 96/0±04/98 µM/min/mgprotein و Km آن در مرحله لگاريتمي µM 08/4±93/142 و در مرحله ايستا µM 14/1±39/106 تعيين گرديد.(P < 0.05) بحث و نتيجه گيري: ميزان فعاليت اسيد فسفاتاز در پروماستيگوت هاي مرحله ايستا 23 درصد نسبت به پروماستيگوت هاي لگاريتمي افزايش نشان داد. هم چنين Vmax مرحله ايستا نسبت به لگاريتمي 23 درصد افزايش وKm آن 28 درصد كاهش نشان داد. تغييرات در خصوصيات آنزيم اسيد فسفاتاز طي مرحله رشد پروماستيگوت ها احتمالاً موجب مهيا شدن يكي از عوامل ضروري جهت مورد تهاجم قرار دادن ماكروفاژها توسط انگل است و اين تغييرات از عوامل موثر در عفوني شدن پروماستيگوت ها مي باشد.

Introduction: Leishmania is an obligate int-racellular parasite that causes a wide range of disease. This parasite is transmitted via the bite of infected sandfly. The parasite lives in the body of sandfly as promastigote form. Growth of promastigote comprised of two phases: none virulence logarithmic and virulence stationary phases. Given to the accumulation of acid phosphatase (ACP) in the stationary phase and its role in the virulence of the parasite, in this study the properties, Km and Vm of ACP enzyme were measured in the logarithmic and stationary phases. Materials & Methods: The present study was a cross-sectional study. To culture pro-mastigotes, Leishmania major (L.major) (MRHO/IR/75/ER) from previously infect-ed Balb/c mice were transferred to medium. Growth curve was generated by daily coun-ting of the parasites and based on this curve logarithmic and stationary phases were divided. Frozen promastigotes of each stage with sodium acetate and Triton-X-100 were homogenized and centrifuged and ACP was measured in the supernatant by calorimetric assay. Findings: Logarithmic and stationary par-asites were collected in the fourth and seventh days, respectively. The amount of ACP activity was determined as 0.9 ± 0.03 in logarithmic and 1.18 ± 0.01 µM/min/mg protein in stationary phases. Also Vm of this enzyme was 75.76 ± 0.57 in logarithmic and 98.04 ± 0.96 in stationary phases and Km was determined 142.93 ± 4.08 µM and 106.39± 1.14 µM in logarithmic and stationary phases, respectively (P < 0.05). Discussion & Conclusion: In stationary promastigotes the rate of ACP activity and Vm were 23% higher and Km was 28% low-er than in logarithmic phase. Changes in the properties of ACP are probably one of the essential factors for parasites to attack the macrophages and these variations are very important parameters in pathology of the promastigotes.