جداسازي سلول‌هاي پيش‌ساز مشتق از فور اسكين انساني و تمايز آن‌ها به نورون و سلول گليال

Isolation of skin-derived precursors from human foreskin and their differentiation into neurons and glial cells

800x600 زمينه و هدف: سلول‌های پيش‌ساز مشتق از پوست نوعی سلول پيش‌ساز هستند كه از كشت درم پستانداران به‌دست آمده و در محيط كشت دو ردۀ نورونی و مزودرمی را توليد می‌كنند. دستيابی به اين سلول‌ها به‌عنوان يك منبع اتولوگ و در دسترس سلول‌هاي پيش‌ساز عصبی، گزينه‌مناسبی در درمان بيماری‌های‌مختلف سيستم عصبی می‌باشد. اين مطالعه به‌منظور راه‌اندازی نحوه جداسازی، كشت، تكثير و تمايز سلول‌های پيش‌ساز مشتق از پوست انسانی در كشور انجام شده است. روش بررسی: ابتدا نمونه‌های پوست فور اسكين انسانی به قطعات كوچك تقسيم و پس از هضم آنزيمی در محيط تكثيری كشت داده شدند. پس از پاساژ پنجم با كشت سلول‌هاي حاصله در شرايط تمايزی عصبی، تمايز انجام شد. برای شناسايی هويت سلول‌ها از تكنيك‌هاي ايمونوسيتوشيمی و RT-PCR استفاده شد. توانايی تمايز به نورون و سلول گليال پس از رنگ‌آميزی با آنتی‌بادی‌هاي اختصاصی در سه تكرار بيولوژيك بررسی شد. يافته‌ها: پس از تمايز، سلول‌های β- III توبولين مثبت و نوروفيلامنت- M مثبت مشاهده شدند كه ماركرهای اختصاصی سلول عصبی هستند. همچنين سلول‌های Glial fibrillary acid protein (GFAP) مثبت و S100 مثبت ديده شدند كه اين ماركرها به‌طور اختصاصی در سلول‌های گليال بيان می‌شوند. خصوصيات مورفولوژيك نيز ماهيت سلول‌های تمايز يافته را به‌عنوان نورون و سلول گليال تاييد نمود. نتيجه‌گيری: سلول‌هاي به‌دست آمده از پوست فور اسكين انسانی در محيط كشت، بسته به شرايط القايی محيط توانايی تمايز به نورون و سلول گليال را دارند. Normal 0 false false false EN-GB X-NONE AR-SA MicrosoftInternetExplorer4 /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable {mso-style-name:"Table Normal"; mso-tstyle-rowband-size:0; mso-tstyle-colband-size:0; mso-style-noshow:yes; mso-style-priority:99; mso-style-parent:""; mso-padding-alt:0cm 5.4pt 0cm 5.4pt; mso-para-margin:0cm; mso-para-margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman","serif";}

Normal 0 false false false EN-US X-NONE AR-SA MicrosoftInternetExplorer4 /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable {mso-style-name:"Table Normal"; mso-tstyle-rowband-size:0; mso-tstyle-colband-size:0; mso-style-noshow:yes; mso-style-priority:99; mso-style-qformat:yes; mso-style-parent:""; mso-padding-alt:0in 5.4pt 0in 5.4pt; mso-para-margin:0in; mso-para-margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:11.0pt; font-family:"Calibri","sans-serif"; mso-ascii-font-family:Calibri; mso-ascii-theme-font:minor-latin; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-theme-font:minor-fareast; mso-hansi-font-family:Calibri; mso-hansi-theme-font:minor-latin; mso-bidi-font-family:Arial; mso-bidi-theme-font:minor-bidi;} Background: Skin-derived precursors (SKPs) are a type of progenitor cells extracted from mammalian dermal tissue and can be differentiate to neural and mesodermal lineage in vitro. These cells can introduce an accessible autologos source of neural precursor cells for treatment of different neurodegenerative diseases. This research was done in order to set up isolation, culture, proliferation and differentiation of human skin derived precursors (hSKPs).Methods: Human foreskin samples were cut into smaller pieces and cultured in proliferation medium after enzymatic digestion. To induce neural differentiation, cells were cultured in neural differentiation medium after fifth passage. We used immunocytochemistry and RT-PCR for characterization of the cells. Neuron and glial cell differentiation potential was assessed by immunofloresence using specific antibodies. The experiments were carried out in triplicate.Results: After differentiation, βΙΙΙ- tubulin and neurofilament-M positive cells were observed that are specific markers for neurons. Moreover, glial fibrillary acid protein (GFAP) and S100 positive cells were identified that are markers specifically express in glial cells. Detected neurons and glials were also confirmed by their morphologic characterizations.Conclusion: Our results demonstrated that skin-derived precursors obtained from human foreskin can exhibit neuronal and glial differentiation potential in vitro, depending on the protocols of induction.