بررسي و خالص‏سازي نسبي آنزيم (هاي) موثر در احياي تلوريت از باكتري نمك دوست Salinicoccus iranensis

Investigation and Partial Purification of Tellurite Reducing Enzyme from a Moderately Halophilic Bacterium Salinicoccus iranensis

مقدمه: امروزه‏ استفاده‏ بيش‏ از حد از تلوريت، محيط را متحمل اثرات سمي ناشي از اين اكسي‏آنيون كرده است. از اين رو تيمار زيستي مناطق آلوده، به عنوان روشي ارزان و سازگار با محيط زيست، مطرح است. اگرچه اثرات سمي تلوريت براي بيشتر ميكروارگانيسم‏ها گزارش شده ولي گونه‏هاي مختلفي از باكتري‏ها، از جمله باكتري نمك دوست مورد استفاده در اين پروژه مي‏تواند بر سميت آن با احياي اين اكسي‏آنيون‏ به شكل عنصريش غلبه كند. هدف اين مطالعه، شناسايي مسير آنزيمي به سم‏زدايي تلوريت بود‏‏. مواد و روش‏‏ها: در ابتدا به منظور بالا بردن فعاليت آنزيمي و از دست ندادن آن طي فرآيند‏ خالص‏سازي، بهينه‏سازي آزمون مناسب براي بررسي فعاليت آنزيمي و شرايط توليد آن انجام شد. بهينه‏سازي با "روش يك عامل‏ در هر زمان" انجام شد. عامل‏هاي مختلفي از جمله: زمان، درصدهاي مختلف مايه‏تلقيح، اسيديته‏، غلظت‏هاي مختلف تلوريت و نمك‏هاي مختلف بهينه شد. به‏منظور اطمينان در طي پژوهش ميزان حذف تلوريت نيز بررسي شد. خالص‏سازي آنزيم مورد نظر با روش‏هاي مختلف مانند، رسوب با آمونيوم سولفات و كروماتوگرافي ستوني ميان‏كنش هيدروفوب با غلظت 4/1 مولار اشباع آمونيوم سولفات انجام شد. خلوص آنزيم در طي هر مرحله با SDS-PAGE بررسي شد. نتايج: شرايط بهينه‏ به‏دست آمده نشان داد كه در زمان 30 ساعت، 3 درصد مايه‏تلقيح، اسيديته‏ 5/7، بدون حضور تلوريت و در 5 درصد نمك NaCl، بالاترين ميزان فعاليت آنزيم و حذف تلوريت مشاهده مي‏شود. خالص‏سازي آنزيم به ميزان زيادي پروتيين‏هاي غيرمرتبط را كاهش داد و تغليظ يكي از باندها كه زيرواحدي از آنزيم مورد هدف بود، را باعث شد. در بخش پروتييني به طور نسبي خالص‏شده، نشان داده شد كه علاوه بر فعاليت تلوريت ردوكتازي، فعاليت سلنيت و نيترات ردوكتازي نيز در اين بخش وجود دارد. بحث و نتيجه‏گيري: اين پژوهش، در مسير شناسايي بيشتر فيزيولوژي ميكروارگانيسم‏هاي‏ هالوفيل و بررسي آنزيم دخيل در احياي تلوريت گام برداشته و آنزيم مسوول را در باكتري مربوطه بهينه‏ و تا حدي خالص‏سازي كرده است.