تشخيص فنوتيپي و ملكولي بتالاكتامازهاي TEM، PER و VEB در سويه‎هاي باليني اشريشياكلي

Phenotypic and molecular detection of TEM, PER, and VEB beta-lactamases in clinical strains of Escherichia coli

چكيده زمينه و هدف: آنزيم‎هاي بتالاكتاماز TEM، VEBو PERاز آنزيم‎هاي بتالاكتاماز وسيع‎الطيف هستند كه قادر به هيدروليز پني‎سيلين‎ها، سفالوسپورين‎ها و آزتريونام مي‎باشند. هدف از اين بررسي تعيين فراواني اشريشياكلي‎هاي توليدكننده بتالاكتاماز وسيع‎الطيف و ارزيابي مولكولي بتالاكتامازهاي TEM، PER و VEB در سويه‎هاي باكتري اشيرشياكلي بود. مواد و روش‎ها: تعداد 200 سويه اشريشياكلي از نمونه‎هاي كلينيكي جدا شد و حساسيت آنتي‎بيوتيكي سويه‎ها با روش ديسك ديفيوژن تعيين گرديد. توليد آنزيم‎هاي بتالاكتاماز وسيع‎الطيف با استفاده از روش ديسك تركيبي و با آنتي‎بيوتيك‎هاي سفوتاكسيم و سفتازيديم همراه با كلاولانيك اسيد و به تنهايي تعيين گرديد و حداقل غلظت مهار كنندگي سفتازيديم و سفوتاكسيم همراه با كلاولانيك اسيد و به تنهايي با استفاده از روش رقيق سازي آگار مشخص شد. در نهايت حضور ژن‎هاي blaTEM،blaVEB و blaPER با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي توسط روش واكنش زنجيره‎اي پلي مراز شناسايي گرديد. يافته‎ها: با آزمون ديسك تركيبي 94 سويه (47 درصد) توليد كننده آنزيم بتالاكتاماز وسيع‎الطيف بودند. از بين 94 سويه توليدكننده بتالاكتاماز وسيع‎الطيف حداقل غلظت مهار كنندگي براي سفتازيديم در 36 نمونه 16، در 44 نمونه 256-32 و در 10 نونه 512? و حداقل غلظت مهار كنندگي براي سفوتاكسيم در 8 نمونه 16، در 68 نمونه 256-32 و در 21 نمونه512? مشخص شد. فراواني آنزيم TEM 44 درصد به دست آمد، اما در سويه‎هاي توليدكننده بتالاكتاماز وسيع‎الطيف ژن‎هاي كد كننده آنزيم‎هاي PER و VEBشناسايي نشد. نتيجه‎گيري: توليد آنزيم‎هاي بتالاكتاماز وسيع‎الطيف در سويه‎هاي مورد مطالعه، 47 درصد است و روش واكنش زنجيره‎اي پلي مراز فراواني بالايي از آنزيم TEM را نشان داد ولي آنزيم‎هاي PER و VEB خوشبختانه هنوز در سويه‎هاي مورد بررسي مشاهده نمي‎شوند. واژگان كليدي: بتالاكتاماز، ديسك تركيبي، بتالاكتاماز وسيع‎الطيف، اشريشياكلي

Abstract Background: TEM, PER, and VEB are extended-spectrum betalactamase (ESBL) enzymes that are capable of hydrolyzing penicillins, cephalosporins, and aztreonam. The aim of this study was to determine the prevalence of ESBL producing E.coli and molecular evaluation of TEM, PER, and VEB B-lactamases among E.coli strains. Materials and Methods: A total of 200 clinical strains of E.coli were isolated from clinical specimens and their antibiotic susceptibility was determined by disk diffusion method. ESBL production was determined using the combined disk method with CAZ and CTX with clavulanic acid and alone. Minimum concentration inhibition (MIC) for CAZ and CTX with clavulanic acid and alone was determined by agar dilution method. Finally, PCR with specific primers was used for determining the presence of blaTEM, blaPER, and blaVEB genes. Results: Combined disk method confirmed 94 strains (47%) to be ESBL producing E.coli. Of the 94 ESBL producing strains, 36 samples had MIC=16, 44 samples had MIC between 32-256, and 10 samples had MIC?512 for ceftazidime, whereas 8 samples had MIC=16, 68 samples had MIC between 32-256, and 21 samples had MIC?512 for cefotaxime. The frequency of TEM was 44%; however, blaPER and blaVEB genes were not detected by PCR among ESBL producing isolates. Conclusion:The results indicated that the high percentage of ESBL producing E.coli is 47% and PCR method showed a high frequency of TEM enzyme, but PER and VEB betalactamase were not found among them. Keywords: Beta-lactamase, Combined disk, ESBL, Escherichia coli