مطالعه فيلوژني جدايه هاي تيلريا آنولاتا از استان البرز با استفاده از توالي ژن هاي 18S rRNA و ITS1-2

Phylogenetic study of Theileria annulata isolates from Alborz province by using 18S rRNA gene and ITS regions sequences

تيلريوز گرمسيري بيماري انگلي ناشي از تك ياخته تيلريا آنولاتا بوده و بوسيله كنه هاي جنس هيالوما منتقل مي شود. تشخيص بيماري معمولا" با مشاهده انگل در گسترش هاي خون محيطي، طحال و غدد لنفاوي صورت مي گيرد. امروزه روش هاي ملكولي با حساسيت و ويژگي بالايي به منظور تشخيص و شناسايي عامل بيماري در دام هاي مبتلا و ناقل، مطالعات همه گيري شناسي و بررسي هاي فيلوژني مورد استفاده قرار مي گيرد. با توجه به حضور تيلريوز گاوي در كشور، مطالعه فيلوژني تيلريا آنولاتا با استفاده از بررسي توالي ژن 18S rRNA و نواحي ITS شامل (ITS1, 5.8S rRNA , ITS2) مربوط به دو جدايه استان البرز به همراه رده سلولي سويه واكسن تيلريوز گاوي مورد توجه قرار گرفت. توالي هاي مورد نظر ابتدا با PCR تكثير شده و تعيين توالي گرديد. درخت فيلوژني بر اساس توالي هاي ناحيه ITS و ژن 18S rRNA ترسيم شد . نتايج اين مطالعه نشان داد كه ژن 18S rRNA داراي ارزش شناسايي در حد جنس و توالي ITS در حد گونه مي باشد. يافته هاي حاصل از بررسي درخت فيلوژني توالي كامل ژن 18S rRNA نشان داد گونه هاي بيماريزاي تيلريا آنولاتا، تيلريا لستوكاردي و تيلريا پاروا در يك خوشه و مستقل از ساير گونه هاي تيلريا قرار مي گيرند.

Tropical theileriosis is a tick-transmitted disease which caused by obligative intracellular protozoan Theileria annulata. Diagnosis is usually based on identification of parasite in Giemsa stained smears of peripheral blood, spleen or lymph nodes. Today, the molecular methods with high sensitivity and specificity are used for diagnosis of infected and carrier animals, epidemiological and phylogenetic studies. Due to the presence of bovine theileriosis in Iran, T. annulata phylogenetic analysis has been focused using 18S rRNA gene and ITS region sequences (ITS1, 5.8S rRNA, ITS2) for two Alborz Theileria annulata isolates and bovine theileriosis vaccine strain S15 cell line. The target sequences were amplified by PCR and further PCR product sequencing. The phylogenetic tree were constructed based on 18S rRNA complete gene sequences and ITS region, then the sequences of Iranian isolates and registered Theileria sequences from other countries registered in GenBank were compared. The obtained results showed that the 18S rRNA gene and ITS sequence are valuable for detection and classification at the species and subspecies levels, respectively. Other important finding obtained from the present study was the result from phylogenetic tree of complete 18S rRNA gene sequences that revealed the highly pathogenic Theileria spp. (lymphoproliferative Theileria) including T. annulata, T. lestoquardi and T. parva were placed in a separate cluster away from the other Theileria spp.