مطالعه تجربي فرآوري قرنيه بدون سلول شترمرغ به عنوان زنوگرافت

قرنيه سالم مهمترين عامل در مسير اپتيكي چشم محسوب مي شود. كوري قرنيه به علل و شدت هاي متفاوتي رخ مي دهد و در اغلب موارد مناسب ترين درمان پيوند آلوگرافت است. محدوديت هاي نگهداري و كمبود بافت آلوگرافت، استفاده از بافت زنوگرافت را در كنار بيومتريال هاي سنتتيك و قرنيه مصنوعي، به عنوان جايگزين مطرح ساخته است. تحقيق حاضر با توجه به نياز دسترسي به منابع دهنده بافتي، با استفاده از قرنيه شترمرغ و بهره گيري از فناوري بدون سلول كردن بافت، به تهيه ماتريكس خارج سلولي از قرنيه مي پردازد. ده عدد سر شترمرغ از كشتارگاه تهيه شد. پس از آماده سازي و جداسازي قرنيه، با تركيب دو روش شيميايي مكانيكي و دترجنت يوني، ديسك آسلولار تهيه گرديد. به منظور تاييد حذف سلول ها و حفظ ساختار قرنيه، مقاطع بافتي با ميكروسكوپ نوري و الكتروني، مورد مطالعه ريزبيني و فوق ريزبيني قرار گرفتند. ارزيابي شفافيت و ضخامت قرنيه به صورت ماكروسكوپي صورت گرفت. مطالعه ريز بيني نمونه هاي فرآوري شده نشان دهنده حذف سلول هاي قرنيه و حفظ يكپارچه غشا پايه بود. بررسي بافت همبندي در مطالعه فراساختاري حاكي از عدم بهم ريختگي در ساختار كلاژني به همراه افزايش فاصله بين دستجات كلاژني بود. ديسك آسلولار با درجاتي از كدورت، پس از غوطه ور سازي در گليسرول 100 درصد شفاف گرديد. مطالعه حاضر نشان داد با روش كار اشاره شده، دستيابي به بافت بدون سلول از قرنيه شترمرغ امكان پذير مي باشد و پس از انجام ساير آزمايش ها نظير كشت سلول، ايمني و بيومكانيك، قابليت كاربرد در مطالعات باليني تجربي را خواهد داشت.

Healthy cornea is a major element in optical pathway. Corneal blindness can occur due to various causes and different severities, and almost the best effective treatment is corneal allotransplantation. The limitation of allograft propounds the usage of other alternatives such as xenograft besides synthetic biomaterials and keratoprostheses. The aim of the study is to produce Extra Cellular Matrix (ECM) with decellularization method in ostrichs cornea. The Ostrichs heads were obtained from a local slaughter house. All corneas were excised. Then ECM was prepared by the combination of chemomechanical and ionic detergent methods. Cellular components elimination and stromal structure were assessed by three types of histological staining and ultra-structural studies. Corneal transparency and thickness evaluated in macroscopic observation. Histological staining of the decellularized cornea confirmed the complete removal of corneal cells as well as preserving the integrity of basement membrane. The ultra-structural studies revealed that decellularization process preserved the native structure of the stromal cornea although the collagen bundle space increased slightly. However, after immersing the acellular cornea in 100% glycerol, their optical properties regained to those native corneas. The authors believe that tissue processing method of ostrich cornea which applied in present study can be used as an alternative tissue after completing other examinations such as cell culture, immunological and biomechanical properties.