جداسازي و تشخيص مولكولي پاراميكزوويروس-1 كبوتري از كبوتران مشكوك به بيماري نيوكاسل در شهرستان اهواز

Isolation and molecular diagnostic of pigeon paramyxovirus-1 from suspected pigeons to Newcastle disease in Ahvaz, Iran

بيماري نيوكاسل يكي از مهم‌ترين بيماري‌هاي ويروسي پرندگان است كه گونه‌هاي زيادي از پرندگان از جمله ماكيان اهلي و كبوتران را آلوده مي‌كند. سويه‌ي حادِ ويروس بيماري نيوكاسل كه عامل ايجاد كننده‌ي اين بيماري در كبوتران است پاراميكزوويروس-1 كبوتري (PPMV-1) نام دارد و ميتواند باعث بيماري نيوكاسل در ماكيان اهلي نيز شوند. به منظور جداسازي و تشخيص ملكولي PPMV-1، از 50 گله‌ي كبوتر در شهرستان اهواز در خلال سال‌هاي 93-92، نمونه‌برداري از طريق سوآب‌هاي كلوآكي و دهاني- نايي انجام شد. همچنين از مغز، ناي، ريه، كبد، طحال و لوزه‌هاي سكومي برخي پرندگان تلف ‌شده نيز نمونه‌برداري شد. نمونه‌ها به تخم‌مرغ‌هاي جنين‌دار 11-9 روزه تلقيح شدند و تاييد مثبت بودن مايع آلانتوييك داراي فعاليت هماگلوتيناسيون با آزمايش ممانعت از هماگلوتيناسيون با سرم اختصاصي ضد PPMV-1، انجام شد. سپس RNA‌ي ويروس نمونه‌ها استخراج گرديد و از روي آن cDNA سنتز شد. در واكنش زنجيره‌ي پلي‌مراز (PCR) از توالي‌هاي پرايمري كه قطعه‌ي 535 جفت بازي توليد مي‌كرد، استفاده گرديد. در نهايت محصولات PCR به وسيله الكتروفورز آناليز شدند. نتايج اين مطالعه نشان داد 9 گله از 50 گله، در جداسازي در تخم‌مرغ جنين‌دار و آزمون هماگلوتيناسيون سريع مثبت بودند. آزمايش ممانعت از هماگلوتيناسيون با سرم اختصاصي PPMV-1 تاييد كرد تمامي ويروس‌هاي جداشده PPMV-1 هستند. درصد فراواني جداسازي در اين مطالعه از كبوتران مشكوك به آلودگي با اين ويروس، 18 درصد بود. در PCR تمام 9 گله، مثبت بودند و محصولات PCR اين نمونه‌ها، باند 535 جفت بازي را در الكتروفورز نشان دادند. يافته‌ها‌ي اين مطالعه تاييد مي‌كنند PPMV-1 در كبوتران شهرستان اهواز انزوتيك بوده و مي‌تواند همواره تهديدي براي صنعت پرورش ماكيان اهلي باشد، لذا توالي‌يابي و تعيين ناحيه‌ي شكافت ويروس؛ قرنطينه، حذف و واكسيناسيون موثر كبوتران آلوده و بررسي حدت اين ويروس‌ها در ماكيان صنعتي در پيش‌گيري و كنترل بيماري و چرخش آن از كبوتران به ماكيان و بالعكس بسيار حايز اهميت است.

The Newcastle disease is one of the most important avian viral diseases that infect many species of birds such as chickens and pigeons. Virulent strain of Newcastle disease virus that is the causative agent of this disease in pigeons called pigeon paramyxovirus-1 (PPMV-1) and also cause virulent Newcastle disease in chickens. In order to isolate and clone the F gene cleavage site of PPMV-1, cloacal and oro-tracheal swabs samples were collected from 50 pigeon lofts in Ahvaz during 2013-2014. Also samples of brain, trachea, lungs, liver, spleen and cecal tonsils from the suspected died birds were collected. Each sample after preparation was inoculated to 9 to 11-day-old embryonated eggs and after collection of alantoic fluid, hemagglutination inhibition test was performed by specific positive PPMV-1 serum. Then, virus RNA of sample was extracted and cDNA synthesized. Primer sequences were used to amplify a 535 base pair fragment in polymerase chain reaction (PCR). Finally, PCR products were analyzed by electrophoresis. Results of the present study indicated that 9 of 50 pigeon lofts were positive in embryonated egg and in rapid hemagglutination test. hemagglutination inhibition test with specific PPMV-1 positive serum confirmed that all of isolated viruses are PPMV-1. Eighteen Percent of the suspected pigeons were positive to PPMV-1. PCR, confirmed that all 9 lofts were positive and PCR products of samples indicated 535–base pair fragment in electrophoresis. It was concluded that PPMV-1 was enzootic in pigeon lofts of Ahvaz and could always be a threat for poultry industry. Thus, sequencing and determining the cleavage site of virus; quarantining, eliminating and effective vaccination of infective pigeons and evaluating virulent of these viruses in poultry industry are very important in prevention, control and circulating virus from pigeons to chickens and vice versa.