مرکز منطقه ای اطلاع رساني علوم و فناوري - اندازه گيري ژن uPA در سرطان پستان: انتخاب ژن خانه‏ دار

چكيده فارسي :

چكيده مقدمه: سرطان پستان شايعترين سرطان در ميان زنان در سراسر جهان است. مدتهاي طولاني محققان به دنبال يافتن راههايي براي تشخيص و درمان سرطان در مراحل اوليه‌ بوده‌اند. تحقيقاتي كه به منظور توسعه استفاده از نشانگرهاي زيستي صورت گرفته‌اند در تشخيص و درمان سرطان پستان بسيار موثر بوده و منجر به كاربردي شدن برخي از اين نشانگرها در نزد بيماران شده است. روش‌هاي جاري در اندازه‌گيري نشانگر هاي زيستي مانند ايمونوهيستوشيمي، ايمونوسيتوشيمي و الايزا روش‌هاي مورد تاييد و تكرار‌پذير در آزمايشگاههاي مختلف هستند اما نتايج غيركمي و مراحل كار متعدد و طولاني از نقاط ضعف اين تكنيك‌ها است كه محققان را به جستجو در مورد روشهاي جايگزين مولكولي مانند (Q-RT-PCR)Quantitative Real-Time PCR تشويق مي‌كند. تاييد نهايي اعتبار اين روش براي استفاده در آزمايشگاه هاي تشخيصي نيازمند اعتبارسنجي‌هاي متعدد از جمله در مورد ژن‌هاي خانه دار (Housekeeping genes) مي باشد. روش بررسي: شش ژن خانه‌دار كه به طور معمول در سرطان پستان استفاده شده است (RPLP0, HPRT1, ACTB, GAPDH , GUSB , TFRC)، انتخاب و پايداري بيان آنها براي نرمال كردن بيان ژن uPA، مورد بررسي قرار گرفت. واكنش Q-RT-PCR با استفاده از Master Mix 2x از شركت ‌PrimerDesign در واكنش‌هاي 20 ميكروليتري انجام شد. غلظت نهايي پرايمرها و پروب‌ها به ترتيب 5/0 ميكرومولار و 3/0 ميكرومولار بود. اندازه‌گيري ميزان فلورسانت توسط دستگاه Applied Biosystems 7500 و آناليز داده‌ها توسط نرم‌افزار 7500 software system ver.2.0 انجام شد. براي يافتن پايدارترين ژن‌ خانه‌دار، داده‌ها ابتدا توسط نرم افزار Excel به مقياس خطي تبديل شد. سپس داده‌ها توسط نرم‌افزار geNorm[20] با روش Pair wise comparison و با استفاده از نرم‌افزار NormFinder[22] با روش combined estimate of The intra and inter group validation آناليز شد. يافته ها: در اين مطالعه RPLP0 و GAPDH بيشترين مقدارM و TFRC كمترين مقدار را داشت. (شكل 1) در اين مطالعه TFRC بيشترين پايداري بيان را نشان داد. در اين مطالعه ميزان V براي استفاده از سه و چهار كنترل داخلي به ترتيب 5/0 و 4/0 بود. نتيجه گيري: بر اساس اين مطالعه ژن TFRC ،پايدارترين ژن كنترل و تركيب TFRC و ACTB بهترين تركيب دو ژني براي نرمال‌سازي uPA در سرطان پستان است. لازم به ذكر است كه ژنهاي RPLP0وGAPDH به عنوان رفرانس مناسب توصيه نمي‌شود.