اثر انجماد شيشه اي روي ميزان بلوغ و فراساختار اووسيت‏هاي بالغ شده انساني در محيط آزمايشگاه

The effect of vitrification on maturation and ultrastructure of invitro matured human oocytes

هدف: هدف از اين مطالعه ارزيابي احتمالي اثرات انجماد شيشه‏اي روي ميزان بلوغ و فراساختار اووسيتهاي بالغ شده انساني در محيط آزمايشگاه است. مواد و روش‏ها   : در اين مطالعه از 292 تخمك نابالغ مرحله وزيكول زاينده  و متافاز I به‏دست آمده از بيماران نابارور استفاده شد. تخمك‏ها به دو گروه تقسيم شدند: 1 تخمك‏هاي نابالغ مرحله وزيكول زاينده  (تعداد=145) 2 تخمك‏هاي نابالغ مرحله متافازI (تعداد=147). تخمك‏ها ابتدا منجمد شده و سپس ذوب و بالغ شدند. به‏علاوه از 10 عدد تخمك بالغ شده به‏صورت In vivoبه‏عنوان كنترل استفاده شد. محيط بلوغ شامل Ham’s F10 به همراه FSH و LH و مايع فوليكولي بود. بعد از 36 ساعت تخمك‏ها از لحاظ بلوغ و فراساختار مورد ارزيابي قرار گرفتند. نتايج : ميزان زنده ماندن و دژنراسيون تخمك‏ها در گروه متافاز I نسبت به گروه وزيكول زاينده  كاهش معني‏داري داشت. اما ميزان بلوغ تخمك‏ها بين دو گروه تفات معني‏داري نداشت (06/0>p). به‏علاوه ميزان توقف بلوغ تخمك‏ها بين دو گروه به‏طور معني‏داري بالاتر بود. از نظر فراساختاري تعداد گرانول‏هاي قشري در هر دو گروه  به‏طور قابل ملاحظه اي كاهش يافت. همچنين واكوئل و تجمعات كوچكي از ميتوكندري و شبكه اندوپلاسميك صاف درون سيتوپلاسم اووسيت‏ها ديده شد. نتيجه گيري : فرآيندهاي انجماد و ذوب منجر به تغييرات فراساختاري در نواحي خاصي از اووسيت مي‏شوند و احتمالا كاهش توانايي بلوغ اووسيت‏هاي منجمد شده مي‏تواند مربوط به اين تغييرات باشد.

Aim: The aim of this study was to describe the possible effects of vitrification on maturation rate and ultrastructural morphology of invitro matured human oocytes. Material and Methods: A total of 292 immature Germinal Vesicle (GV) and Metaphase I (MI) oocytes obtained from infertile patients were allocated into two groups: (i) GV oocytes (n=145), (ii) MI oocytes (n=147) . Oocytes were first vitrified and then matured invitro. Supernumerary fresh invivo matured oocytes (n=10) were used as control. invitro maturation media was Ham’s F10 supplemented with FSH+LH and human follicular fluid. After 36h of incubation, the oocytes were investigated for nuclear maturation and ultrastructural changes . Results: The rate of survival and degeneration was significantly higher in Metaphase I than GV group. But, Oocyte maturation rates were not significant between groups (Plt;0.06). In addition, the rate of oocyte arrest was significantly higher in MI oocytes in comparisson with GV oocytes. Ultrastructurally; a drastic reduction was observed in amount of cortical granules at the cortex of vitrifiedwarmed GV and MI oocytes , In addition, Transmission Electron Microscopy (TEM) revealed vacuoles and small mitochondriaSmooth Endoplasmic Reticulum aggregates in the ooplasm of oocytes. conclusion: Freeze/thawing procedures are associated with ultrastructural alterations in specific oocyte microdomains, presumably related to the reduced competence of cryopreserved oocytes to maturation.