مطالعه اثرات سركوب گري باكتري پاستورلا مولتي سيدا (B:۲ (Pasteurella multocida بر روي لنفوسيت هاي گوساله

The Study of Suppressive Effects of Pasteurella multocida B:2 on Calf

سپتي سمي هموراژيك، بيماري حاد گاو و گاوميش در كشورهاي گرمسيري است كه به وسيله كوكوباسيل گرم منفي به نام پاستورلا مولتي سيدا سروتايپ B:2 ايجاد مي شود. شواهد آزمايش پيشين بر روي گاو، دال بر سركوب پاسخ ايمني پس از چالش بوده و در مطالعه حاضر جهت بررسي مقدماتي يافته مذكور، آزمايش هاي in-vitro با استفاده از عصاره پاستورلا و سلول ها ي تك هسته اي خون محيطي (PBMC) گاوي طراحي گرديد تا آثار احتمالي سركوب گري جزء يا اجزائي از باكتري بر لنفوسيت هاي گاوي بررسي شود. از آزمايش سنجش تحريك تكثير لنفوسيتي به منظور ارزيابي آثار عصاره عاري از سلول (CFE) پاستورلا بر روي PBMC استفاده شد. سپس ماده ConA به كشت سلول هاي مورد نظر اضافه و پاسخ تكثيري آن ها با استفاده از روش شمارش آشكارسازي به وسيله ارزيابي فعاليت تايميدين راديواكتيو استفاده گرديد. به علاوه جهت شناسايي اوليه عامل سركوب گر موجود در عصاره از روش هاي حرارت دادن، دياليز، و تهيه پروتئين غشاي خارجي (OMP) استفاده گرديد. نتايج نشان داد افزودن عصاره CFE با غلظت 50 ميكروگرم در ميلي ليتر باعث كاهش پنج برابري پاسخ تكثيري سلول هاي PBMC به ConA مي شود. حرارت دادن عصاره CFE در دماي 80 درجه سانتي گراد به مدت پنج دقيقه فعاليت سركوب گري آن را به طور كامل از بين برد. OMP فعاليت سركوب گري مشابه با عصاره نشان داد. اين مطالعه حاكي از وجود اثر سركوب گري جزء يا اجزائي از باكتري پاستورلا مولتي سيدا بر پاسخ تكثيري PBMC به ConA بود. اين جزء از باكتري دست كم در بخشي از ساختمان پروتئيني است و جزو پروتئين هاي غشاي خارجي است.

Haemorrhagic Septicaemia (HS) is an acute disease of cattle and buffaloes in tropical countries، caused by Pasteurella multocida (P. multocida) serotype B:2 ، a Gram-negative coccobacillus. Some evidences of immunosuppression have been observed after a challenge with a virulent strain on vaccinated calves. To further investigate the observed suppressive effect، the present study was set up using a cell-free extract and calf PBMCs، for in vitro experiments. A lymphocyte stimulation assay was used to assess the effects of a cell-free extract (CFE) of P. multocida on peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)، isolated from calves. To assess the proliferative response of PBMCs obtained from calf، ConA was added to the PBMCs culture، and the proliferation was quantified by assessment of radioactivity of absorbed 3H-Thymidine. In order to characterize the agent(s)، the CFE extract suppressive activity was assessed after heating and dialyzing and also by using an outer-membrane protein (OMP) preparation in experiments. Results indicated that addition of CFE at 50 μg/ml caused a five fold decrease in the proliferative response to ConA. Heating at 80˚C for five min completely destroyed the suppressive properties. An outer membrane protein (OMP) preparation of P. multocida B:2 markedly suppressed the proliferative response of PBMCs to ConA. The study was indicative of a suppressive component(s) of P. multocida B:2 on proliferative response of calf PBMCs to ConA. The active part of the suppressive agent(s) was likely to be at least in some part of protein، and is of OMPs.