بررسي چندشكلي ناحيه ي اينترون چهارم و اگزون پنجم ژن گرلين برخي توده هاي مرغان بومي خوزستان با استفاده از روش PCR-RFLP

Study of polymorphism in intron 4 and exon 5 of ghrelin gene in some masses of Khuzestan native chickens using PCR-RFLP

گرلين يك پپتيد تحريك كننده ي هورمون رشد است كه در طيور متشكل از 26 اسيدآمينه بوده و نقش مهمي در تعادل انرژي، چاقي و رفتار دريافت غذا ايفا مي كند. اين پپتيد باعث افزايش اشتها و اكتساب وزن مي شود. تحقيق حاضر به منظور شناسايي چندشكلي موجود در ناحيه ي اينترون چهارم و اگزون پنجم ژن گرلين مرغان بومي استان خوزستان با استفاده از روش PCR-RFLP انجام شد. براي اين منظور از تعداد 100 قطعه مرغ بومي ايستگاه تكثير و اصلاح نژاد مرغ بومي نهاده هاي دامي جهاد استان خوزستان به صورت تصادفي خون گيري انجام شد. استخراج DNA از نمونه ي خون با كمك روش نمكي انجام گرفت. سپس، براي تعيين كميت و كيفيت DNA استخراجي از نانودراپ و ژل آگارز يك درصد استفاده شد. با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي، قطعه ي 228 جفت بازي از ناحيه ي اينترون چهارم و اگزون پنجم به كمك واكنش زنجيره اي پلي مراز (PCR) تكثير شد. در نهايت نمونه هاي تكثير شده با كمك آنزيم HaeIII مورد هضم آنزيمي قرار گرفتند كه پس از هضم قطعات 173 و 55 مشاهده شد. نتايج نشان داد كه در تمامي نمونه ها بعد از هضم آنزيمي، تنها يك شكل باندي وجود داشت. لذا با توجه به يكسان بودن ژنوتيپ نمونه هاي بررسي شده در اين تحقيق هيچ جهشي مورد تاييد قرار نگرفت. عدم مشاهده ي چندشكلي احتمالاً مي تواند به علت بسته بودن محيط پرورش و كوچك بودن تعداد نمونه هاي بررسي شده باشد.

Ghrelin is a stimulating peptide for growth hormone in poultry, which is composed of 26 amino acids. With the release of growth hormone, ghrelin stimulates food intake and body weight gain leads to energy balance. This study was performed in order to identify polymorphism in fourth intron and fifth exon in Khuzestan province native chicken’s ghrelin gene using the PCR-RFLP method. Therefore, random blood sampling from 100 chickens of native chickens in Khuzestan province breeding and Jihad livestock inputs was performed. DNA extraction from blood samples was performed using the salt method. The quantity and quality of the extracted DNA were determined using gel electrophoresis (1%) and nanodrop. Then, 228 bp fragment of fourth intron and fifth exon region were amplified using polymerase chain reaction (PCR). Finally, the amplified samples were digested with HaeIII enzyme, and the digestion products of 173 and 55 bp were found. The results showed that in all samples after enzymatic digestion there was only one band form. Therefore, with respect to the similarity of studied genotypes in this study, mutations were not verified. The absent of polymorphism in the studied mass (population) could be due to the environmental conditions and relatively low number of samples.