جداسازي و پاتوتيپينگ ويروس‌هاي نيوكاسل با استفاده از روش‌هاي RT- PCR وMDT در جوجه‌هاي گوشتي مرغداري‌هاي استان فارس

Isolation and pathotyping of Newcastle viruses by RT-PCR and MDT methods from broiler chickens in Fars province

سابقه و هدف: بيماري نيوكاسل يكي از بيماري‌هاي ويروسي حاد و مسري در ماكيان مي‌باشد كه همواره خسارات اقتصادي جبران ناپذيري را بر صنعت طيور وارد كرده است. با توجه به تلفات ايجاد شده توسط اين ويروس، تشخيص بيماري و نيز اطلاع كافي از سويه‌هاي در حال گردش ويروسي امري حياتي به نظر مي‌رسد. هدف از اين پژوهش، جداسازي و پاتوتايپينگ ويروس نيوكاسل در مرغداري‌هاي گوشتي استان فارس با استفاده از روش‌هاي RT-PCR و MDT بود. مواد و روش‌ها: در مطالعه حاضر 300 نمونه سواب كلواك و بافت ناي از 30 واحد مرغداري با آمار تلفات بالا و درگير با بيماري‌هاي تنفسي در استان فارس جمع آوري گرديد. نمونه‌ها به تخم مرغ‌هاي جنين دار 11-9 روزه تلقيح و پس از 72 ساعت مايع آلانتوئيك با استفاده از آزمون هماگلوتيناسيون، RT-PCR و MDT از نظر وجود ويروس نيوكاسل و نيز تايپ بندي سويه‌ها مورد بررسي قرار گرفتند. يافته‌ها: از مجموع نمونه‌هاي مورد بررسي با روش مولكولي، 10 نمونه با تكثير قطعه 535 جفت بازي آلوده به ويروس نيوكاسل شناخته شدند. سپس با روش MDT سويه‌هاي ولوژنيك، مزوژنيك و لنتوژنيك به ترتيب در 6، 3 و 1 نمونه شناسايي گرديد. نتيجه گيري: به دليل جداسازي ويروس‌هاي ولوژنيك و مزوژنيك از مرغداري‌ها،ضرورت پايش مستمر سويه‌هاي واكسن وارزيابي ايمني زايي آنها وجود دارد.

Background and objective: Newcastle is an acute and contagious disease in poultry that has irreparable economic detriments in the poultry industry. Due to many deaths in broiler chicken flocks, it is vital to detect and characterize the viral circulation. The aim of this study was to isolation and pathotyping of Newcastle virus by RT-PCR and MDT (Mean death time) methods in broiler chickens in Fars province. Material and Methods: In this study 300 tracheal tissue and cloacal swab samples from 30 infected poultry farms with a high mortality and respiratory disease were collected in Fars province. The samples were inoculated in the allantoic cavities of 9-11-day-old embryonated chicken eggs. After 72 hours incubation, the allantoic fluids were tested by hemagglutination, RT-PCR and MDT methods for the present of Newcastle virus and their pathotyping. Results: 10 out of total samples investigated by molecular method showed a 535bp amplification band fragment and were identified as Newcastle viruses. Also, among these samples, velogenic, mesogenic and lentogenic strains identified in 6, 3 and 1 sample respectively by MDT method. Conclusion: Based on isolation of velogenic and mesogenic viruses in broiler chickens flocks, it is essential to continues survey vaccine strains and their effectiveness.